檢驗科作為臨床診斷的核心環(huán)節(jié)，醫(yī)用顯微鏡的制樣質(zhì)量直接影響病理分析、細胞學檢測及微生物鑒定的準確性。從樣本采集到Z終封片，每一步操作都需嚴守規(guī)范，避免“假陽性”或結(jié)構(gòu)失真。

一、樣本采集與預(yù)處理：確保代表性

檢驗科樣本類型多樣（如血液、尿液、痰液、脫落細胞），采集需嚴格遵循無菌操作原則，避免污染或降解。例如：

血液涂片：需采集新鮮抗凝血（如EDTA管），推片時控制角度（30°-45°）與速度，確保血膜均勻、尾端漸薄，避免紅細胞重疊或白細胞堆積。

尿液離心：需根據(jù)尿量調(diào)整離心時間（通常3-5分鐘，1500-2000rpm），濃縮沉渣至適量，避免過度離心導致細胞破裂或不足導致漏檢。

脫落細胞：需通過刷片、液基細胞學（LBC）等技術(shù)收集宮頸、呼吸道等部位的細胞，確保樣本量充足且W污染。

二、固定與保存：鎖定原始形態(tài)

固定是防止細胞自溶、細菌繁殖及結(jié)構(gòu)變形的關(guān)鍵步驟。常用固定液如95%乙醇、甲醇或福爾馬林需根據(jù)樣本類型選擇：

細胞學樣本：95%乙醇固定可快速穿透細胞膜，保留核質(zhì)細節(jié)；福爾馬林固定適用于組織切片，但需注意其可能引起蛋白質(zhì)交聯(lián)導致抗原性改變。

微生物樣本：需根據(jù)菌種特性選擇固定方式（如革蘭氏染色需自然干燥后固定），避免過度加熱導致形態(tài)改變。

保存條件：固定后樣本需置于4℃冰箱或室溫避光保存，避免反復(fù)凍融導致結(jié)構(gòu)破壞；活細胞樣本需使用專用培養(yǎng)基維持活性。

三、染色策略：增強結(jié)構(gòu)對比度

染色是凸顯目標結(jié)構(gòu)的核心手段，需根據(jù)檢測目標選擇染色劑與染色時間：

血液涂片：瑞氏-吉姆薩染色可區(qū)分白細胞類型、紅細胞形態(tài)及血小板數(shù)量；需控制染色時間（通常5-10分鐘），避免欠染（核結(jié)構(gòu)不清晰）或過染（背景過深）。

微生物檢測：革蘭氏染色需嚴格區(qū)分陽性菌（紫色）與陰性菌（紅色）；抗酸染色用于結(jié)核分枝桿菌檢測，需注意脫色時間控制避免假陰性。

特殊染色：如PAS染色用于糖原檢測、鐵染色用于骨髓細胞分析，需根據(jù)試劑特性調(diào)整步驟與時間，確保特異性染色效果。

四、蓋玻片與封片：減少光學畸變

蓋玻片需清潔無劃痕，避免氣泡或雜質(zhì)干擾成像。封片時需控制樹膠用量，避免溢出污染物鏡；需緩慢加蓋防止氣泡產(chǎn)生；對于需動態(tài)觀察的樣本（如活細胞），可采用水溶性封片劑維持樣品活性。封片后需檢查樣品是否平整，避免因蓋玻片傾斜導致圖像畸變。

五、操作規(guī)范與質(zhì)量控制：避免人為誤差

檢驗科制樣需嚴格遵循標準化操作流程（SOP），并定期進行質(zhì)量控制：

人員培訓：操作人員需經(jīng)過專業(yè)培訓，熟練掌握推片、染色、封片等技能，避免因操作不當導致結(jié)構(gòu)失真或數(shù)據(jù)誤差。

設(shè)備維護：顯微鏡需定期校準（如物鏡倍率、照明均勻性），確保成像質(zhì)量穩(wěn)定；染色設(shè)備需清潔無殘留，避免交叉污染。

質(zhì)控樣本：需定期使用標準質(zhì)控樣本（如已知細胞形態(tài)的血涂片、標準菌株）進行驗證，確保染色效果、成像質(zhì)量及診斷準確性符合要求。

六、環(huán)境與安全：保障人員與樣本安全

檢驗科制樣環(huán)境需滿足生物安全要求，避免交叉污染與職業(yè)暴露：

生物安全：操作需在生物安全柜中進行，避免氣溶膠擴散；廢棄樣本需按規(guī)定進行滅菌處理（如高壓蒸汽滅菌）。

個人防護：操作人員需佩戴手套、口罩、護目鏡等防護裝備，避免直接接觸樣本或有害試劑。

環(huán)境控制：實驗室需保持清潔、干燥，溫度控制在22±2℃，濕度40-60%，避免灰塵、氣流或溫度波動干擾制樣過程。

檢驗科醫(yī)用顯微鏡制樣是一門“細節(jié)決定診斷”的技術(shù)。從樣本采集到封片保存，每一步都需嚴謹操作以避免“視覺誤差”。