一、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1.  結(jié)果

分別繪出你在低倍鏡、高倍鏡和油鏡下觀(guān)察到的金黃色葡萄球菌及枯草芽孢桿菌的狀態(tài)，包括在三種情況下視野中的變化，同時(shí)注明物鏡放大倍數(shù)和總放大率。

2.  思考題

（1）在使用高倍鏡和油鏡進(jìn)行調(diào)焦時(shí)，應(yīng)將鏡筒徐徐上升還是下降？為什么？

（2）用油鏡觀(guān)察時(shí)，為什么要在載玻片上滴加香柏油？

（3）在明視野顯微鏡下，觀(guān)察細(xì)菌形態(tài)時(shí)，你認(rèn)為用染色標(biāo)本好，還是用未染色的活標(biāo)本好，為什么？

實(shí)驗(yàn)方法原理 生活的細(xì)菌在明視野顯微鏡下觀(guān)察是透明的，不易看清。暗視野顯微鏡的原理與來(lái)自縫隙的一束強(qiáng)光通過(guò)暗室時(shí)，可清楚地看到其中細(xì)微灰塵的現(xiàn)象是一樣的，即給樣品照明的光不直接穿過(guò)物鏡，而是由樣品上反射或折射的光進(jìn)入物鏡，那么，在漆黑的視野中，由于反差增大了，使樣品能夠看得更清楚。因用暗視野法可以在黑暗的視野中看到光亮的菌體，故在觀(guān)察生活細(xì)菌及細(xì)菌運(yùn)動(dòng)時(shí)常采用此法。

暗視野顯微鏡的構(gòu)造主要是采用一種特殊的聚光器，在聚光器的下方中央為圓形黑盤(pán)所遮，光僅由周緣進(jìn)入，使光會(huì)聚于載玻片上，并斜照物體，物體經(jīng)斜射照明后，發(fā)出反射光可進(jìn)入物鏡，這樣，造成顯微鏡視野黑暗，而其中的物體明亮。如無(wú)暗視野顯微鏡時(shí)，只需將明視野顯微鏡上的聚光器取下，換上暗視野聚光器即可；也可在明視野顯微鏡聚光器下面的濾光鏡支架上放一片星形擋板（star diaphragm）構(gòu)成暗視野，這種方法適用于低倍鏡觀(guān)察。

在暗視野中，由于有些活細(xì)胞其外表比死細(xì)胞明亮，所以暗視野也被用來(lái)區(qū)分死、活細(xì)胞，此技術(shù)現(xiàn)已被用于各種酵母細(xì)胞的死、活鑒別。此外，暗視野顯微鏡對(duì)于觀(guān)察嬌弱的微生物，如梅毒密螺旋體（Treponema pallidum）特別有用。

實(shí)驗(yàn)材料 釀酒酵母

儀器、耗材 顯微鏡載玻片蓋玻片無(wú)菌水

實(shí)驗(yàn)步驟

1.  選厚薄在1.0—1.2 mm的干凈載玻片一塊，滴上釀酒酵母懸液，加蓋玻片（注意切勿有氣泡存在）。

2.  將聚光鏡光圈調(diào)至1.4。

3.  光源的光圈孔調(diào)至*大。

4.  在聚光器上放一大滴香柏油，將標(biāo)本置載物臺(tái)上，旋上聚光器使油與載玻片接觸（不能有氣泡發(fā)生）。

5.  用低倍物鏡及7×目鏡進(jìn)行配光對(duì)準(zhǔn)物體。調(diào)節(jié)聚光器的高度，首先在載玻片上出現(xiàn)一個(gè)中間有一黑點(diǎn)的光圈，*后為一光亮的光點(diǎn)，光點(diǎn)愈小愈好，由此點(diǎn)將聚光器上下移動(dòng)時(shí)均使光點(diǎn)增大。

6.  換上所需目鏡和高倍鏡，緩慢上升物鏡進(jìn)行調(diào)焦，至視野中心出現(xiàn)發(fā)光的樣品。

7.  在蓋玻片上滴一滴香柏油，并將油鏡轉(zhuǎn)至應(yīng)在位置調(diào)節(jié)配光，進(jìn)行觀(guān)察。

收起 

注意事項(xiàng)

1.  進(jìn)行暗視野觀(guān)察時(shí)，聚光鏡與載玻片之間滴加的香柏油要充滿(mǎn)，否則照明光線(xiàn)于聚光鏡上面進(jìn)行全面反射，達(dá)不到被檢物體，從而不能得到暗視野照明。

2.  在進(jìn)行暗視野觀(guān)察標(biāo)本前，一定要進(jìn)行聚光鏡的中心調(diào)節(jié)和調(diào)焦，使焦點(diǎn)與被檢物體一致。

3.  由于暗視野聚光鏡的數(shù)值孔徑都較大（NA=1.2—1 .4），焦點(diǎn)較淺，因此，過(guò)厚被檢物體無(wú)法調(diào)在聚光鏡焦點(diǎn)處，一般載玻片厚度為1.0 mm左右，蓋玻片厚度宜在0.16 mm以下，同時(shí)載玻片、蓋玻片應(yīng)很清潔，無(wú)油脂及劃痕，否則都會(huì)嚴(yán)重地?cái)_亂*終的像。

一、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1.  思考題

（1）觀(guān)察活細(xì)胞的個(gè)體形態(tài)，你認(rèn)為用顯微鏡的明視野好？還是暗視野好？為什么？

（2）你所觀(guān)察到的釀酒酵母，在暗視野中能否區(qū)分死、活細(xì)胞？

（3）暗視野觀(guān)察時(shí)，所用的載玻片、蓋玻片有何要求？為什么？