病理診斷的準(zhǔn)確性和顯微鏡樣品制備質(zhì)量密切相關(guān)。本文聚焦病理科常見制片問題，結(jié)合《臨床技術(shù)操作規(guī)范-病理學(xué)分冊》要求，提供系統(tǒng)化解決方案。

一、固定環(huán)節(jié)：避免組織自溶與抗原流失

問題表現(xiàn)：細胞核模糊、免疫組化染色失敗
解決方案：

固定液選擇

常規(guī)活檢：4%中性甲醛緩沖液（pH7.2-7.4）

免疫電鏡：2.5%戊二醛+2%多聚甲醛混合液

固定時間控制

小標(biāo)本（<1cm3）：6-12小時

大標(biāo)本：對半切開+真空負壓滲透（時間減半）

驗證方法

刀片切開組織：觀察切面是否呈乳白色

Trichrome染色：核質(zhì)分界清晰為合格

二、切片質(zhì)量：杜絕厚薄不均與刀痕

問題表現(xiàn)：切片皺褶、厚度超標(biāo)（>4μm）
解決方案：

設(shè)備維護

磨刀角度：保持20-22°（用角度規(guī)檢測）

防卷板清潔：每次切片后用乙醇擦拭

操作規(guī)范

蠟塊修整：保留組織周圍1.5cm石蠟

切片速度：勻速轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)輪（2-3圈/秒）

特殊組織處理

脂肪組織：冷凍切片（-20℃預(yù)冷刀架）

骨組織：脫鈣后真空滲透（避免碎裂）

三、染色問題：優(yōu)化對比度和特異性

問題表現(xiàn)：核漿對比差、背景著色深
解決方案：

H&E染色

蘇木素染色：初染3分鐘→分化至粉紅色→返藍5分鐘

伊紅染色：0.5%伊紅Y水溶液浸泡1-3秒

特殊染色

Masson三色：酸性復(fù)紅需**控時（30秒）

PAS染色：氧化劑濃度梯度預(yù)實驗

質(zhì)控指標(biāo)

核質(zhì)比：1:3-1:5為Z佳

切片厚度變異系數(shù)＜10

四、脫水與透明：防止氣泡和脆裂

問題表現(xiàn)：封片后產(chǎn)生氣泡、切片碎裂
解決方案：

梯度脫水

酒精梯度：70%→80%→95%→****（每級5分鐘）

叔丁醇替代：用于線粒體保護

透明驗證

二甲苯浸泡后，用濾紙測試無濕潤痕跡

封片技巧

中性樹膠預(yù)熱至40℃（降低黏度）

蓋玻片傾斜45°緩慢放下

五、污染控制：杜絕微生物滋生

問題表現(xiàn)：切片出現(xiàn)絮狀沉淀物
解決方案：

預(yù)防措施

固定液添加0.01%疊氮化鈉

切片刀用75%酒精擦拭消毒

應(yīng)急處理

污染切片：重新脫水至70%酒精后浸泡于1%氫氧化鈉24小時

嚴重污染樣本：廢棄處理并消毒器械

病理制片是**診斷的基礎(chǔ)，需建立標(biāo)準(zhǔn)化操作流程（SOP），關(guān)鍵步驟設(shè)置質(zhì)量控制點。建議每月進行制片優(yōu)良率統(tǒng)計，定期參加CAP認證培訓(xùn)。掌握這些核心技能，您將顯著提升病理診斷的準(zhǔn)確性和可靠性。